Extraordinära fördelar med ultrasensitiv ELISA med Thio-NAD-cykling vid bestämning av Dengue NS1-proteinet
1. Introduktion
Denguefeber är en akut infektionssjukdom orsakad avDenguevirus genom bett från en infekterad Aedes-art (Ae. aegypti eller Ae. albopictus) mygga,med huvudsymtom som hög feber, yrsel, huvudvärk, utslag ochAllvarlig smärta (smärta i öga, muskler, leder eller ben), osv. Denna sjukdom är mycket utbredd i tropiska och subtropiska klimat. Ungefär 100 till 400 miljoner människor smittas varje år, varav över 80 % vanligtvis är milda och asymtomatiska. Trots detta kan svår denguefeber öka risken för död om den inte behandlas korrekt. Därför är tidig diagnos av denna sjukdom viktig för dess snabba behandling.Värt att notera är att icke-strukturellt protein 1 (NS1), ett högkonserverat glykoprotein, huvudsakligen utsöndras under infektionen avDengueVirus, som intensivt anses vara den huvudsakliga patogenesfaktorn förDenguefeber. Därför används NSI generellt som biomarkör för tidig upptäckt av denna sjukdom.
I denna studie används en sandwichenzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) i kombination medThionicotinamid adenin-dinukleotid (THIO-NAD/S-NAD)Cykelmetoden (hädanefter kallad ultrasensitiv ELISA) används för att upptäcka NSI, följt av jämförelse med NAAT för att bekräfta dess detektionsnoggrannhet.
2. Fördelar och nackdelar med traditionella detektionsmetoder förDenguefeber
För närvarande gäller tHär är fyra huvudsakliga detektionsmetoderför Denguefeber.
Viral isolering och identifiering har hög specificitet men är tidskrävande och tar minst 5 dagar. The Snabbantigen Testet är det snabbaste och mest kostnadseffektiva bland de andra metoderna, men känsligheten är känslig och specificiteten är relativt låg. Serologiska tester baserade på IgM och IgG begränsas av antalet dagar av infektion, somdetTestet måste skjutas upp tills antikroppsnivån är stiger till en märkbar nivå.
På kliniken tillämpas ofta NAAT för att fastställaDenguefeber av smuts av dess höga känslighet och specificitet. Denna metod är dock dyr, arbetsamisk och benägen att vara falsk positivitet, vilket måste utföras av utbildad personal.För att övervinna nackdelarna med dessa metoder finns en ny detektionsmetodultrasensitiv ELISA är tillämpad i denna studie.
3. Arbetsflöde för ultrasensitiv ELISA med thio-NAD-cykling
Ett par antikropparär används för att fånga NS1-proteinet i sandwichen ELISA, samt alkalisk fosfatasär märkt på den sekundära antikroppen. Förutom antikropparna finns en androsteronderivat, 3α-hydroxysteroiddehydrogenas, tio-NAD och NADHär används för att konstruera thio-NAD-enzymcykelsystemet. Under thio-NAD-cyklingsreaktionen ackumulerades thio-NADH ständigt i ett triangulärt talsystem och kunde direkt mätas vid en absorption på 405 nm.
4. Jämförelsen mellan ultrasensitiv ELISA och NAAT vid detektion av Dengue NS1-proteinet
I NAAT är 60 exemplar dengue-positiva och 25 dengue-negativa. NAAT:s cykeltröskelvärde (CT) för dessa denguepositiva prover varierade från 12,42 till 31,41.I ultrasensitiv ELISA är 59 prover motsvarande positiva för NAAT-resultaten, medan 25 prover är helt motsvarande negativa för NAAT-resultaten.Jämfört med NAAT är känsligheten och specificiteten för ultrasensitiv ELISA 98,3 % respektive 100 % (Tabell 2). Av 60 NAAT-bekräftade denguepositiva patientprover är endast ett prov negativt i ultrasensitiv ELISA. NAAT-data visade att provet är ett typ 4 DENV-infektionsfall med ett CT-värde på 21,59. Resultaten från den ultrasensitiva ELISA stämmer nästan perfekt överens med NAAT-resultaten, med ett kappavärde på 0,972 (95 % KI: 0,917-1.0).
5. Slutsats
UMetoden för känslig ELISA är lätt att utföra och kräver inga professionella trainees för att använda den. TDetektionen kan påbörjas omedelbart efter att ett litet prov mottagits. Den är särskilt lämplig för tidig upptäckt avDenguesjukdom i Låginkomstländer.Referens
Chen, Po-Kai et al. "Avancerad detektionsmetod för dengue NS1-protein med ultrasensitiv ELISA och Thio-NAD-cykling." Virus, vol. 15,9, 1894. 8 sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Produktfördelar och egenskaper hosBONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC är oen av de få företagen iKina som kan producera Thio-NAD, med"Bonzyme" Helenzymatisk metod (miljövänlig; inga skadliga lösningsmedelsrester) och unik "Bonpure" sjustegs reningsteknologi. BONTAC integrerar forskning och utveckling, produktion och försäljning, med självägda fabriker och ett antal internationella certifieringar för att säkerställa hög kvalitet och stabil produktförsörjning.
