En vetenskaplig metod för kvantifiering av NMN i biologiska prover
1. Introduktion
Tillägg avNikotinamidmononukleotid (NMN)för att reglera uppNivå avNikotinamidadenin-dinukleotid (NAD+)har presenterats som en lovande anti-aging-intervention. Men det är fortfarande en allvarlig utmaning att träffa korrektkvantifiera NAD+-intermediater, NMN Särskilt. Denna studie är drivkraften för att introducera en ny metod, dubbelisotopmedierad LC-MS/MS-metodik (dimeLC-MS/MS), för exakt kvantifiering avNMN i biologiska prover.2. Faktorer som påverkar den noggranna detekteringen av NMN
NMN är svårt att exakt upptäcka på grund av dess sårbarhet för enzymatisktnedbrytning, omvandling i provbearbetning, dess komplexa beteenden under olika kolonn- och extraktionsförhållanden, samt matriseffekt.
Specifikt har NMN egenskaperna hög polaritet och låg volatilitet, vilket är lätt att lösa i vatten men svårt att lösa i organiska lösningsmedel. Dessa egenskaper begränsar i hög grad tillämpningen av många konventionella kvantitativa analysmetoder.
BIologiska proversåsom blod bär betydande aktiviteter hos CD38 och CD73 (ecto-5)’-nukleotidas), båda skulle kunna använda NMN som substrat.
NMN:s beteende i kolonnen är mycket komplext, troligen på grund av laddningarnas bipartita natur, så att subtila skillnader i extraktions- och kolumnförhållanden påverkar den tillförlitliga och noggranna detektionen av NMN avsevärt.
3. Copingstrategier fördimeLC-MS/MS att minska påverkan av impact factors
För att undvika störningar från ovan nämnda faktorer är ett pRototypKolumnNMN-2 tillämpas. Den här kolumneninnehållas C18-baserade högrena kiseldioxidpartiklar som är mer kapabla att binda hydrofila föreningar än kolpartiklar, vilket förbättrar separationsförmågan.Perklorinsyra (PCA) används eftersom det kan effektivt extrahera NAD+ och NMN från biologiska prover såsom plasma med minimal Förluster.
För att justera för matriseffekter,a fast mängd (1 μM) av varje Isotopisk föreningis tillagda tillBiologiska prover före PCA-extraktionen.
4. Fördelens av dimeLC-MS/MS
DVilka isotopiska NMN-standarder som finns, NMN (M + 14) och NMN (M + 5) kan enligt LC-MS/MS-driven metodik exakt spåra NMN:s öde under provbearbetning, vilketökar avsevärt noggrannheten och tillförlitligheten i NMN-mätning i biologiska prover. Dessutom kan dimeLC-MS/MS utvärdera extraktionseffektiviteten och de absoluta koncentrationerna av NMN i olika typer av biologiska prover.
5. Slutsats
Thär nya LC-MS/MS-driven metodik med dubbla isotopiska NMN-standarder kan AccuraTely och reliably mät NMN i biologiska prover. Den kan användas för framtida studier av NMN-intag.6. Referens
Unno, Junya et al. "Absolut kvantifiering av nikotinamidmononukleotid i biologiska prover med dubbelisotopmedierad vätskekromatografi-tandem masspektrometri (dimeLC-MS/MS)." NPJ AGING VOL. 10,1 2. 2 jan. 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1Varför väljaBONTAC?
BONTACär ledaren för det globalaNMNindustri. Vi har den första helenzymkatalysteknologin i Kina och har blivit det ledande företaget inom Koenzymprodukter som används i stor utsträckning inom hälsoindustrin, medicin och skönhetsindustri, Grönt jordbruk, biomedicin och andra områden. Noterbart ärBONTAC är NMNråmaterialleverantör till det berömda David Sinclair-teamet vid Harvard University. Våra tjänster och produkter är pålitliga. Dessutom,BONTACharen oberoendeKoenzym Forskningscentrum för ingenjörsteknologi på provinsiell nivå i Kina och självägda fabriker, där produkternas renhet och stabilitet kan säkerställas.
