Extraordinära fördelar med ultrakänslig ELISA med Thio-NAD-cykling vid bestämning av dengue NS1-protein

1. Inledning

Denguefeber är en akut infektionssjukdom som orsakas av Denguevirusgenom bett av en infekterad mygga av arten Aedes (Ae. aegypti eller Ae. albopictus), med de huvudsakliga symtomen som hög feber, yrsel, huvudvärk, hudutslag och Allvarligsmärtor (ögon-, muskel-, led- eller bensmärta) etc. Denna sjukdom är allmänt utbredd i tropiska och subtropiska klimat. Uppskattningsvis 100 till 400 miljoner människor smittas varje år, varav över 80 % vanligtvis är milda och asymtomatiska. Allvarlig denguefeber kan dock öka risken för dödsfall om den inte behandlas på rätt sätt. Tidig diagnos av denna sjukdom är därför viktig för att den ska kunna behandlas i tid.

Det är värt att notera att icke-strukturellt protein 1 (NS1), ett mycket konserverat glykoprotein, huvudsakligen utsöndras under infektionen av Denguefeber virus, som intensivt anses vara den huvudsakliga patogenesfaktorn för Denguefeber. Därför används NSI i allmänhet som en biomarkör för tidig upptäckt av denna sjukdom.

I denna studie genomfördes en sandwichenzymkopplad immunadsorberande analys(ELISA)i kombination med thio nikotinamid adenindinukleotid (tio-NAD/S-NAD) cykelmetod (nedan kallad ultrakänslig ELISA) används för att detektera NSI, följt av jämförelsen med NAAT för att bekräfta dess detektionsnoggrannhet.

2. För- och nackdelar med traditionella detektionsmetoder för Denguefeber 

För närvarande är tHär är fyra huvudsakliga detektionsmetoder för Denguefeber.


Virusisolering och identifiering har hög specificitet men är tidskrävande och tar minst 5 dagar. Antigentestet i form av snabbtest är den snabbaste och mest kostnadseffektiva bland de andra metoderna, men sensitiviteten och specificiteten är relativt låg. Serologiska tester baserade på IgM och IgG begränsas av antalet infektionsdagar, eftersom den Testet måste skjutas upp tills nivån av antikroppar stiger till en detekterbar nivå.

På kliniker används NAAT ofta för att bestämma Denguefeberpå grund av dess höga känslighet och specificitet. Denna metod är dock dyr, mödosam och benägen till falsk positivitet, som måste utföras av den utbildade personalen. För att övervinna nackdelarna med dessa metoder har en ny detektionsmetod tagits fram ultrakänslig ELISA är tillämpas i denna studie.

3. Arbetsflöde för ultrakänslig ELISA med tio-NAD-cykling

Ett par antikroppar varaanvänds för att fånga upp NS1-proteinet i sandwich-ELISA, och alkaliskt fosfatas varapå den sekundära antikroppen. Förutom antikropparna, ett androsteronderivat, 3α-hydroxisteroiddehydrogenas, tio-NAD och NADH äranvänds för att konstruera tio-NAD-enzymets kretsloppssystem. Under tio-NAD-cykelreaktionen ackumulerades tio-NADH ständigt i ett triangulärt tal och kunde mätas direkt vid en absorbans på 405 nm.

4. Jämförelsen mellan ultrakänslig ELISA och NAAT vid detektion av Dengue NS1-protein

I NAAT är 60 exemplar denguepositiva och 25 är denguenegativa. NAAT-cykeltröskelvärdet (CT) för de denguepositiva proverna varierade från 12,42 till 31,41. I den ultrakänsliga ELISA-studien är 59 prover helt negativa enligt NAAT-resultaten, medan 25 proverna är helt negativa enligt NAAT-resultaten.

Jämfört med NAAT är sensitiviteten och specificiteten för det ultrakänsliga ELISA-testet 98,3 % respektive 100 % (tabell 2). Av 60 NAAT-bekräftade denguepositiva patientprover är endast 1 prov negativt i den ultrakänsliga ELISA. NAAT-data visade att provet är ett typ 4 DENV-infektionsfall med ett CT-värde på 21,59. Resultaten av den ultrakänsliga ELISA-studien stämmer nästan helt överens med NAAT-resultaten, med ett kappavärde på 0,972 (95 % KI: 0,917-1.0).

5. Slutsats

Den ultrakänsliga ELISA-metoden är enkel att utföra och kräver inga professionella praktikanter för att fungera. Detektionen kan startas omedelbart efter att ha mottagit ett litet prov. Det är särskilt lämpligt för tidig upptäckt av denguefeber i låginkomstländer.

Hänvisning

Chen, Po-Kai et al. "Avancerad detektionsmetod för Dengue NS1-protein med hjälp av ultrakänslig ELISA med Thio-NAD-cykling." Virus, vol. 15,9, 1894. 8 sep. 2023, doi:10.3390/v15091894

Produktfördelar och egenskaper hos BONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC är oEn av de få företagen i Kinasom kan producera Thio-NADmed "Bonzyme"Helenzymatisk metod(miljövänlig;Inga skadliga lösningsmedelsrester) och unik "Bonpure" sjustegs reningsteknik. BONTAC integrerar forskning och utveckling, produktion och försäljning, med egenägda fabriker och ett antal internationella certifieringar för att säkerställa hög kvalitet och stabil leverans av produkter.

Friskrivning

BONTAC ska inte ta något ansvar för eventuella krav som uppstår direkt eller indirekt på grund av att du har förlitat dig på informationen och materialet på denna webbplats.